L’utilisation de virus pour délivrer des gènes et plus particulièrement des marqueurs fluorescents aux cellules du système nerveux est connue pour fonctionner efficacement. Cependant, vous disposez de différents vecteurs viraux présentant des caractéristiques différentes, et la décision de privilégier l’un ou l’autre virus doit être basée sur de nombreuses considérations, parmi lesquelles :

• Taille du matériel génétique à transporter dans le vecteur (gène d'intérêt + séquences régulatrices),
• Cellules ciblées (nombre, phénotype, statut mitotique),
• Vitesse et durée d'expression

Il est possible de cibler l'entrée du virus spécifiquement dans les neurones, mais pas avec l'un des vecteurs viraux décrits ci-dessous sous leur forme actuelle. Nous testons la possibilité de produire également des virus neuronotropes comme les virus forestiers Semliki, ou de pseudotyper certains de nos vecteurs avec des protéines de virus neuronotropes : nous vous tiendrons informés des évolutions. Mais il est certainement possible de restreindre l’expression du transgène aux neurones en utilisant des promoteurs spécifiques des neurones comme le promoteur de la synapsine I.

Nous pouvons vous aider à choisir le meilleur outil pour votre expérience, nous vous suggérons donc de nous contacter avant de commander un vecteur viral.

Consultez la liste des vecteurs viraux disponibles au Centre de Neurophotonique.

Pour plus d'informations sur les protéines fluorescentes, vous pouvez visiter FPbase.org (lien externe)

Votre vecteur viral arrivera congelé, dans des tubes Eppendorf de 500 ul.

Gardez le vecteur viral à -80 °C à tout moment et tenez compte des éléments suivants pour chaque type de vecteur viral :

1. Vecteurs à base de lentivirus : très sensibles aux cycles de congélation/dégel, c'est à dire qu'une baisse significative du titre est attendue après chaque cycle de congélation/dégel
2. Vecteurs à base de rétrovirus : très sensibles aux cycles de gel/dégel
3. Virus adéno-associé/Vecteurs de virus adéno-associés auto-complémentaires : peuvent être décongelés et recongelés plusieurs fois sans perte significative de titre.

Nous vous fournirons un titre pour votre vecteur viral en TU (unités de transduction). Il s'agit du nombre de virions capables de provoquer efficacement l'expression du transgène viral dans une cellule (à partir de la lignée cellulaire particulière utilisée pour le titrage), suite à l'exposition d'une couche quasi confluente de ces cellules à une solution vectorielle. Veuillez garder à l’esprit que les unités utilisées pour les titres de vecteurs viraux entre les différents laboratoires producteurs de vecteurs ne sont pas toujours identiques et que le titre d’un même échantillon peut varier de plusieurs ordres de grandeur en fonction de l’unité de titre utilisée. Le titre de votre vecteur viral a été déterminé à partir d’un échantillon décongelé de votre vecteur et doit donc représenter le titre attendu lors de la première décongélation de vos aliquotes. Lorsque vous injectez votre vecteur viral à un animal ou exposez des cellules en culture, rappelez-vous que la plupart des vecteurs sont thermolabiles : décongelez rapidement les aliquotes puis conservez-les sur la glace jusqu'à la dernière minute. Si possible, utilisez des solutions et des récipients froids pour diluer les échantillons.

Les vecteurs à base de lentivirus et de rétrovirus sont sensibles aux solvants organiques comme l'éthanol, aux détergents et doivent être dilués dans des solutions isosmotiques. Les vecteurs AAV sont résistants à l’éthanol et à de faibles concentrations de Triton X-100 et d’autres détergents, et restent intégrés dans une large gamme d’osmolarités.

Portez toujours des gants, décontaminez et éliminez les déchets de manière appropriée (nous recommandons un agent de blanchiment ordinaire à 5 % pour la décontamination et l'élimination).

Taille de l'aliquote

Aliquote du virus en stock :

• AAV
  100ul | 1E12GC/ml à 2E13 GC/ml (en fonction des performances de croissance de la séquence du vecteur et du sérotype)
• Lentivirus
  50ul | Unités transductrices concentrées du virus 10E07 à 10E08 (en fonction des performances de croissance de la séquence du vecteur, titre FIV inférieur)

Certaines constructions nécessiteront un MTA, d'autres sont couvertes par des accords de distribution.

• Nous vous recommandons de procéder à votre commande.
• Nous vous contacterons si un ou plusieurs MTA sont nécessaires.
• Nous vous fournirons soit les documents, soit les liens pour obtenir le MTA requis.