Votre vecteur viral arrivera congelé, dans des tubes Eppendorf de 200ul contenant 10µl de vecteur viral concentré (sauf si vous spécifiez à l’avance une autre taille d’aliquote).
Gardez le vecteur viral à -80C en permanence, et tenez compte de ce qui suit pour chaque type de vecteur viral :
- Vecteurs à base de lentivirus : très sensibles aux cycles de congélation/décongélation, c’est-à-dire qu’une baisse significative du titre est attendue après chaque cycle de congélation/décongélation.
- Vecteurs à base de rétrovirus : très sensibles aux cycles de gel/dégel.
- Vecteurs à base d’adénovirus (AD5) : assez sensibles aux cycles de gel/dégel (c’est-à-dire petite baisse des titres après les cycles de gel/dégel).
- Vecteurs à base de virus adéno-associés (AAV)/virus adéno-associés auto-complémentaires (scAAV) : peuvent être décongelés et recongelés plusieurs fois sans perte significative de titre.
Nous vous fournirons un titre pour votre vecteur viral qui est en TU (Transducing Unit). Cette unité correspond au nombre de virions capables de provoquer efficacement l’expression du transgène viral dans une cellule (provenant de la lignée cellulaire particulière utilisée pour le titrage), après exposition d’une couche de cellules proches de la confluence aux vecteurs viraux. Veuillez garder à l’esprit que les unités utilisées pour les titres de vecteurs viraux, entre les différents laboratoires producteurs de vecteurs, ne sont pas toujours identiques, et que le titre pour un même échantillon peut varier de plusieurs ordres de grandeur selon l’unité de titre utilisée. Le titre de votre vecteur viral a été déterminé à partir d’un échantillon décongelé du vecteur choisi et devrait donc représenter le titre auquel vous pouvez vous attendre lors de la première décongélation de vos aliquotes. Lorsque vous injectez votre vecteur viral dans un animal ou que vous exposez des cellules en culture, n’oubliez pas que la plupart des vecteurs sont labiles à la chaleur : faites dégeler rapidement les aliquotes et gardez-les sur la glace jusqu’à la dernière minute. Si possible, utilisez des solutions et des récipients froids pour diluer les échantillons.
Les vecteurs à base de lentivirus et de rétrovirus sont sensibles aux solvants organiques comme l’éthanol ainsi qu’aux détergents, et doivent être dilués dans des solutions isosmotiques. Les vecteurs AD5 et AAV sont résistants à l’éthanol et à de faibles concentrations de Triton X-100 et d’autres détergents, et restent intégrés dans une large gamme d’osmolarités.
Portez toujours des gants, et décontaminez et éliminez les déchets de manière appropriée (nous recommandons d’utiliser de l’eau de Javel à 5% pour la décontamination et l’élimination).
Taille de l’aliquote
Aliquote du virus en stock :
- Adénovirus
50ul 10E11 à 10E12pfu/ml (selon la performance de croissance en fonction du sérotype) - AAV
100ul | 2E12GC/ml à 2E13GC/ml (selon la performance de croissance en fonction de la séquence d’ADN du vecteur et de son sérotype) - Lentivirus
50ul | Virus concentré 10E07 à 10E08 unités de transduction (selon la performance de croissance de la séquence du vecteur)
